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人全外显子测序_10G_建库测序
浏览: 发布日期:2017-10-25
建库测序流程如下:
1 样本DNA提取及检测:提取样本的基因组DNA,检测DNA的完整性、纯度和浓度等;
 
2 文库构建及质检:将纯化基因组DNA随机打断,连接测序接头,使用Agencourt AMPure SPRI 珠将连接接头模板纯化下来,提取出长约200bp 片段,纯化后片段与外显子捕获系统进行杂交富集,杂交片段结合于链霉亲和素磁珠上进行纯化和PCR 扩增,文库进行质检;
 
3 上机测序:文库质检合格后,上机测序。
本产品是只建库和测序,测序完成后出具数据质控报告,数据质控报告包括的内容如下:
 
1 测序数据产出统计
 
2 Reads测序质量图
组织样本:
 
1 组织样品总重量大于50mg;单个组织块重不大于30mg。单个组织块较小方便直接称量提取DNA,避免切割样品过程中可能造成的DNA降解;
 
2 组织采集后用液氮急速冷冻,获得较好的DNA质量;
 
3 细胞样品需细胞个数≥1×107。
 
 
 
血液样本:
 
1 全血样品(推荐EDTA抗凝剂,避免使用肝素抗凝)体积≥2mL;
 
2 血液采集后2h内分离出白细胞,-80℃保存,可有效提高DNA提取效率。未抽提白细胞的全血可在-80℃存放(需逐级降温),建议将全血分装存放,以避免反复冻融影响提取效果;
 
3 全血样品4℃存放时间以不超过一周为宜(仅适用于DNA提取),存放时间过长会显著降低DNA提取效率。常温保存超过2天、4℃保存超过一周的血液样品,DNA 提取质量无法保证;
 
4 干冰运输血液样品,避免在运送过程中融化。
 
 
 
 
 
DNA样本(请使用干冰运送):
 
1 DNA总量≥3 ug,浓度≥50 ng/ul;
 
2 OD260/280在1.8-2.0之间,OD260/230≥1.4,无降解,无蛋白及RNA污染。
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