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10M_clean reads_small RNA测序_建库测序
浏览: 发布日期:2017-10-25
Hiseq4000测序,SE50测序,产出10M clean reads。
 
 
建库测序流程如下:
 
1 分离Small RNA: 使用PAGE胶分离不同片段大小的RNA。切取18-30nt之间的条带,回收Small RNA。
 
2 接头连接: 配制连接体系,混匀离心,适温连接一段时间。
 
3 RT-PCR: 配制反转录体系,在PCR仪上适温反应一定时间,使连接产物反转录成双链,再配制PCR反应体系,在PCR仪上按照一定程序进行扩增。
 
4 PCR产物回收纯化: 使用PAGE胶对PCR产物进行切胶回收纯化,回收产物溶于EB solution。最后贴上标签,至此文库构建完成。
 
5 文库质量检测: 构建好的文库使用Agilent 2100 Bioanalyzer和ABI StepOnePlus Real-Time PCR System进行质量和产量的检测。
本产品属于只建库测序产品,提供数据的质控报告,数据质控报告包括的内容如下:
 
1 数据产出统计
 
2 数据质控
 
2.1 reads上碱基组成百分比
 
2.2 reads上碱基质量值分布
样品类型:真核生物、原核生物;完整且无污染的总RNA;血清血浆及FFPE样品。
 
样品需求量(单次):≥1 μg;血清血浆:20ng;FFPE:200ng
 
样品浓度:15 ng/μL≤c≤500 ng/μL;
 
样品纯度:OD260/280 =1.8~2.2;OD260/230≥2.0;28S:18S≥1.5;RIN≥8.0;23S:16S≥1.5 (此项要求只针对原核生物)。

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