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LncRNA_12G_建库测序(只限人和大小鼠)
浏览: 发布日期:2017-10-25
建库测序流程如下:
1 样品RNA提取及检测:提取样品RNA,检测RNA的完整性、纯度和浓度等;
 
2 文库构建及质检:RNA样品检测合格后,去除rRNA,将RNA随机打断,合成cDNA第一链,接着合成cDNA第二链并纯化,纯化cDNA进行末端修复、加A尾和接头,进行片段大小选择,用USER酶降解cDNA第二链,最后进行PCR扩增得到链特异性文库,文库构建完成后进行质检;
 
3 上机测序:文库质检合格后,上机测序。
本产品仅包括建库测序,下机后提供数据质控报告,数据质控报告包括的分析内容:
 
1 数据产出统计
 
2 测序质量分布检查
 
3 测序错误率分布检查
 
4 测序GC含量分布检查
 
5 原始数据过滤统计
组织样本(请干冰运送):
 
1 动物组织:取下新鲜组织,冲洗残留血液,将组织切成长宽高均≤0.5 cm,保存于冻存管中,立即液氮速冻;
 
2 植物组织:取下新鲜组织,冲洗干净,将组织切成小块,保存于冻存管中,立即液氮速冻;
 
3 肿瘤组织:准确选取肿瘤组织,冲洗干净,将组织切成小块,保存与冻存管中,立即液氮速冻。
 
 
 
细胞样本(请干冰运送):
 
1 贴壁细胞:细胞数≥106个,以3X106-1X107个为宜,可以将细胞经裂解液裂解后冻存运输;
 
2 悬浮细胞:细胞数≥106个,以3X106-1X107个为宜,可以将细胞经裂解液裂解后冻存运输;
 
3 单细胞:客户用我公司配置的裂解液裂解分离后的单细胞或微量细胞,裂解后立即封好EP管,液氮速冻,-80℃保存,干冰运输。
 
 
 
全血样本:
 
1 使用BD公司的PAXgene Blood RNA Tube收集1-2ml血样,采样后立即上下颠倒混匀,先在-20℃放置24h,然后转移至-70℃或-80℃长期保持,干冰运输;
 
2 在含有EDTA抗凝剂的新鲜全血样本中加入等体积PBS,充分混匀,离心收集沉淀的白细胞,用TRIzol试剂裂解,-80℃保存,干冰运输;
 
3 外周血样本用TRIzol LS处理得到裂解液,保存于-80℃,干冰运输。
 
 
 
血清样本:
 
1 用医用血清管收集全血,颠倒混匀,离心得到上层血清样本,-80℃保存,干冰运输。
 
 
 
血浆样本:
 
1 用医用抗凝管或已装有抗凝剂(柠檬酸钠或EDTA,不可用肝素)收集全血样本,颠倒混匀,离心得到上层血浆,-80℃保存,干冰运输。
 
 
 
RNA样本:
 
1 总RNA溶解于DEPC-水或者Nuclease-free Water中;
 
2 总量≥20 ug,浓度≥300 ng/ul,OD260/280≥2.0,完整性RIN≥6.8,液氮速冻,干冰运输。
 
 
 
石蜡包埋样本:
 
1 每个样本每个样本8~10片石蜡,用石蜡切片机将包埋块制成≥10 um的切片;
 
2 常温保存,常温运输。
 
 
 
酵母菌:
 
1 所需酵母菌的量≤ 1X107个,以5X105-1X107个为宜;
 
2 将酵母细胞沉淀迅速置于液氮中,干冰运输。
 
 
 
真菌:
 
1 所需的真菌量为100 mg,称重后立即液氮研磨,转移至离心管中,-80℃保存,干冰运输。
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